徠卡生物顯微鏡到目前為止，冰涼固定，冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細胞x線微區的常規方法。對該方法的細節做以下幾點說明。

徠卡生物顯微鏡這兩種細胞中電解質的含量及分布十分不同。圓形心肌細胞中Na‘甚高而K’極低，線枝體中的ca”濃度十分高（250mm01／k8drywe炒t）。經過與其它分析方法核對，證明圓形細胞高Na4低K’及線粒體內高ca2’是由于在細胞分離過程中細胞膜受損傷的結果。細肋及組織的冰涼固定方法往往是先采取獰冷固定（quench一frMM），然后放入液氮中保存。淬冷固定對于保存的效果十分重要。活細胞或新鮮組織中富含水分，當淬冷時往往是紉胞或組織與碎冷劑（特別是用液氮粹冷時）直接接觸的部位先冷凍固定，因而形成。便妨礙了細胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區分析時，常常發現較大的細胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發生，便使用熔點比液氮高但低干一806c的物質作碎冷劑。這類物質很多，但zui易獲得，價格員低廉的是濃態丙烷（沸點一42．120c，熔點一187．10c，分子量44．1），冷卻速度也zui快。但其缺點是易燃。具體操作如下，對固定單根肌纖維而言。

徠卡生物顯微鏡一個非常重要的問題是在取材和分離細胞過程表10一1大鼠胰腺外分泌部分經過冰涼置換和樹脂包埋（Fs），冰凍干燥和樹脂包埋（FD）后冰凍超簿團片后，冰凍干燥（蠅）后細跑各部位65元素成分含量（均值L標準差mMd兒e）（引自R叨su88）中必須十分仔細，絕不能損傷待觀察分析的細胞。因為作x線微區分析不但步驟繁多，而且成本甚高，如果經過長時間及多步騾的處理后，所分析的細胞是受損傷的細胞或死細胞，得出錯誤的結論是非常遺憾的。如經過膠元酶處理分離出的心肌細胞有兩種形態，一種是長桿狀，排斥臺盼藍門種是圓形，月臺盼藍染色對著藍色。后者是在細胞分離過程中受損傷的瀕死細胞。

徠卡生物顯微鏡可將肌纖維放在一特制的架上，使該肌纖維收縮達到某時相需要固定時，立即啟動噴咀，使液態丙烷向肌纖維噴射，使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細胞或分離的細胞，首先低速離心使細胞集中，將細胞轉移到一個導熱性能良好的銀質小管中、將該小管放入液態丙烷中獰冷固定。Hall實驗室固定大鼠胰腺時，先將兩鋼塊用液氦（或液氮）預冷，用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后，使姨腺淬冷固定。組織或細胞淬冷固定后轉移到液氮中可長期保存。

徠卡生物顯微鏡除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外，在這里再介紹一種科學家們用過的沉積技術。在進行分析前加入一種物質，使之與待分析的成份形成沉積物以固定它，然后分析該沉積物。例如，人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細胞中的ca2’。前者對胞漿中低濃度的ca”敏感性不夠高；焦銻吱鹽的敏感性高些，可與腦漿中游離ca2’形成電子致密的沉積物，但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物，特異性較差。盡管如此．焦銻憨鹽與EGTA聯合應用的組化反應顯示腦內cas‘效果是很好的。標本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標本的制備，不同之處在于則osod固定前聞3％焦銻酸鉀（磷酸鹽緩沖液，pH7．6）固定6小時，在染色的肌肉超薄切片上，在每個肌節的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區分析。人女I也曾用二氨基聯苯胺四鹽酸（DAB）去沉淀含血紅素的物質等等。這種組化的沉淀反應與x射線微區分橋聯合應用在不具備冰凍超薄切片條件的實驗室可考慮采用。根據待分析元素的峰高可做半定量。

備注：徠卡生物顯微鏡關于組織塊的體積部分新聞由北京中儀光科科技發展有限公司編輯上傳。