徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡的使用

一、目的

了解暗視野顯微鏡的構造和原理，掌握其使用方法。

二、原理

徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡是使用一種特殊的暗視野聚光鏡或暗視野聚光器，不讓光線直接照射被檢物體并進入物鏡，而是使光線只能從周緣進入并會聚在被檢物體的表面，利用被檢物體表面的反射光線來觀察物體的輪廓。暗視野顯微鏡適合于觀察在明視野中不易觀察的折射，如細菌的運率很強的物體，以及普通明視野顯微鏡看不到的微小顆粒（0.2—0.04μm）動或鞭毛等。

徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡有兩種主要類型：一種是折射型，即在普通聚光鏡放置濾光片的地方放上一個中心有光擋的小鐵環就成為一個暗視野聚光鏡。另一種是反射型，有不同形式的產品。

三、材料

1、菌種，枯草芽孢桿菌或大腸桿菌

2、儀器及其他，普通光學顯微鏡、暗視野聚光器、顯微鏡燈、蓋玻片（厚度1.0—1.2㎜）蓋玻片（＜0.17㎜）、香柏油、二甲苯、擦鏡紙等。

四、方法與步驟

1、安裝暗視野聚光器，取下普通聚光器，換上暗視野聚光器，上升聚光器使其透鏡頂端與鏡臺平齊。

2、調節光源，光源宜強，將光源的光圈開到zui大，聚光器光圈調至1.4如顯微鏡本身不帶光源，可用顯微鏡燈，調整好光源和反光鏡，使強光束正好落在反光鏡中央并反射入聚光器。

3、制片，取載玻片一塊，加一滴幼齡菌液，蓋上蓋玻片。注意不要有氣泡，載玻片和蓋玻片應非常清潔，無油脂、無劃痕，以免反射光線。

4、置片，加香柏油于聚光器透鏡的頂部，下降聚光器，然后把制片放置在載物臺上，并把標本移至物鏡下，升高聚光器，使鏡油與載玻片背面相接觸，避免產生氣泡。

5、調焦和調中，用低鏡進行，調節聚光器的高低，zui初可出現一個中間有一黑點的光環，再調至成為一個光點，光點愈小愈好。然后用聚光鏡的調中螺絲進行調節，使光點位于視野的中心，如圖1-2.

6、用油鏡觀察操作方法見實驗1.1可進一步微調聚光器和反光鏡使暗視野照明處于*狀態，并仔細調節粗、細調節螺旋，使菌體更清晰。

五、記錄結果

描述所觀察菌體的運動情況。

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