徠卡冰凍式切片機(jī)切片制樣方法
電鏡樣品制備技術(shù)直接影響樣品的結(jié)構(gòu)和反差。制備高質(zhì)量的超薄切片，是發(fā)揮透
射電子顯微鏡優(yōu)良性能的前提。透射電子顯微鏡的分辨率理論上可達(dá)到o．3nm左右，
但是六于樣品制備技術(shù)的限制，分辨率很難達(dá)到理論值。對(duì)于生物樣品來(lái)說(shuō)，一般只能
達(dá)到2nm的水平。
高質(zhì)量的超薄切片基本特征：①樣品應(yīng)該能耐受電子束的強(qiáng)烈照射．不變形和升華
等。②能進(jìn)行屯了染色．提高反差。③l50一100kv加速電壓范圍內(nèi)，切片厚度在
50—loonm。④樣品必須*下燥，以保持電鏡L作狀態(tài)F不損傷。
超揍切片技術(shù)包括取樣、固定、脫水、滲透、包埋、超薄切片、電子染色、鏡檢等
制樣步驟。其中取樣、固定、脫水、滲透、包埋等過程與半博團(tuán)片制樣方法相同，下面
重點(diǎn)介紹超薄切片的準(zhǔn)備、超薄切片和電子染色等過程。
1．銅網(wǎng)清洗：超薄切片要放在載網(wǎng)上才能進(jìn)行染色等操作，并zui終放到電鏡中觀察。載網(wǎng)是用元磁性金屬材料做成的，厚50Pm，直徑一般為3咖，也有2皿的。一般用銅材料，所以又叫銅網(wǎng)。在酶組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)中要用金網(wǎng)和鎳網(wǎng)，載網(wǎng)有各種形狀?？筛鶕?jù)樣品和實(shí)驗(yàn)需要，選擇載網(wǎng)的材質(zhì)、形狀和孔眼的大小。銅網(wǎng)主要功能是承載支持膜和樣品。當(dāng)受到電子束照射時(shí)，支持膜不易破裂*照射到銅網(wǎng)網(wǎng)孔中的電子，穿過樣品，通過透鏡成像。碰到銅網(wǎng)載條上的電子，被傳到地，不參與成像，因此銅網(wǎng)還有把樣品上的熱量傳走，減少樣品的熱漂移。銅網(wǎng)要經(jīng)過清洗，方可使用。目前清洗的方法主要有下列幾種：①超聲波清洗法：將用過的銅網(wǎng)放在盛有95％乙醇的燒杯里，置于超聲波清洗器（其內(nèi)有水）中，在800一1000w下清洗30min。將使用過的銅網(wǎng)上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸餾水清洗數(shù)次，再在95％乙醇中清洗，zui后放在墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘干．鏡檢，備用。②酸堿清洗法：將用過的銅網(wǎng)放在一培養(yǎng)皿中，倒入一些濃硫酸或濃鹽酸，不斷地?fù)u動(dòng)（3—5min），直到銅網(wǎng)發(fā)亮為止。然后先用自來(lái)水，后用蒸餾水洗幾次，再放在95％乙醇中清洗，zui后放到墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘下，鏡檢，備用。也可將銅網(wǎng)放在盛有10％NaoH的小錐瓶或試管中煮沸數(shù)分鐘，然后用水洗，干燥、鏡檢，備用。
