徠卡共聚焦顯微鏡的故障排除
在某些實驗過程可能不明原因的無法得出滿意結(jié)果，此時，一個很好的試驗方法是用徠卡熒光顯微鏡檢查標本，如果在徠卡熒光顯微鏡下肉眼可看到熒光，則在徠卡共聚焦系統(tǒng)，其熒光信號應(yīng)很亮。如果在徠卡共聚焦系統(tǒng)看不到圖像，一方面要檢查使用的熒光控針與儀器的激發(fā)波長是否匹配，另一方面應(yīng)使用己知的測試樣本全部檢查共聚焦系統(tǒng)各部分。圖像的數(shù)字文件應(yīng)適當編號，并為具體的實驗者所。尤其是在進行圖像命名時盡量少用姓氏作為文件名，這樣很容易混亂和重復。而且每幅圖像應(yīng)詳細記錄各種采集參數(shù)，包括激光功率、增益、背底水平、針孔直徑、zoom值和使用的物鏡。
在使用
徠卡共聚焦顯微鏡實驗本身的問題常常是由試劑的降解引起的，應(yīng)進行一系列的診斷測試。實驗使用的試劑自己親自新鮮配制。抗體應(yīng)等分為小份后分別儲存。許多試劑可以重復使用，而且并不影響實驗結(jié)果，尤其對于昂貴的試劑和稀有的試劑更應(yīng)注意節(jié)約和盡量重復使用。
有時實驗失敗可能是由于抗體降解引起的。陳舊的標本可造成背底熒光的增加，從標記的第二抗體分離出來的熒光色素和彌散到組織中的熒光色素，可以引起熒光滲透。在盡可能的情況下，應(yīng)使用新鮮制備的標本觀察。有時改變熒光控針的濃度和分布也對獲得理想的實驗結(jié)果大有幫助。如熒光黃滲透到羅丹明通道，可將熒光團調(diào)使羅丹明位于較強的通道，因為熒光黃的激發(fā)光譜有一個尾部位于羅丹明的激發(fā)波長內(nèi)。
