徠卡生物顯微鏡的超薄切片的定量x射線微區(qū)分析

徠卡生物顯微鏡不論外源佐的還是體內(nèi)存在的物質(zhì)，作x射線微區(qū)分析時(shí)，除鑒定其成分外，還需給出“量”。這“量”（即濃度）有相對(duì)及兩種表示方法。

徠卡生物顯微鏡為測(cè)試成分的濃度，L為測(cè)試成分的峰高tl為在分析區(qū)域內(nèi)全部質(zhì)量的x射線強(qiáng)度，即連續(xù)射線的高度。由于有機(jī)物與無(wú)機(jī)物的平均原子密度相差甚大，用超路切片100一200nm標(biāo)本做分析時(shí)使出現(xiàn)了困難。因?yàn)榇郎y(cè)試成分的質(zhì)量相對(duì)很少．而來(lái)源于超薄切片，支持膜、金屬網(wǎng)及標(biāo)本托等的背景（即連續(xù)X射線）十分強(qiáng)，連續(xù)譜的計(jì)數(shù)與其成分原于序數(shù)的平方z”成正比，因而高原子序數(shù)的元素產(chǎn)生的連續(xù)語(yǔ)的強(qiáng)度要比有機(jī)物的連續(xù)諾強(qiáng)度大得多。如Oq（z＝76）的連續(xù)諾強(qiáng)度比相同濃度的生物學(xué)材料的連續(xù)譜強(qiáng)度高100倍。因此便集中考慮以超薄切片（其主要成分為C，N．O和H）為背景，而不再考慮支持網(wǎng)，金屬托等的影響。于是人們制各組成與所測(cè)試的樣品相似的標(biāo)準(zhǔn)樣品，將測(cè)試樣品的特征x射線強(qiáng)度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品特征x射線強(qiáng)度在相同測(cè)試條件下比較，便是徠卡生物顯微鏡超簿切片標(biāo)本定量方法的基本原則。

徠卡生物顯微鏡為測(cè)試成分濃度，r5為標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知濃度，入及人分別為測(cè)試成分和已知成分的峰高。由于在生物學(xué)標(biāo)本的較輕元素的濃度范圍內(nèi)，可以不做原子序數(shù)對(duì)連續(xù)譜效應(yīng)的校正，因此上式可寫為

徠卡生物顯微鏡一個(gè)重要的問題便是定Pd值，基本方法是制各生物標(biāo)本的類似物。要求該類似物勻質(zhì)，含有與生物標(biāo)本同樣的輕元素。外加一種元素r其濃度范圍在生物標(biāo)本所含的范圍內(nèi)，在電子轟擊時(shí)應(yīng)穩(wěn)定，而且在100nm厚的切片中應(yīng)有化學(xué)上的均勻性。這種生物標(biāo)本類似物很多，如Na和k（NaCNS及KCNS）镕子Sp毗樹脂，700C聚合后超薄切片，所余的聚合塊涪于酵以定Na及K的濃度。再如牛血清白蛋白，牛胰島京和Phmnun中均共價(jià)結(jié)合有已知化學(xué)計(jì)量濃度的5和尸。這些蛋白可做為含5和尸的生物標(biāo)本類似鉤”。但這些生物標(biāo)本類似韌并不能包羅生物標(biāo)本中所有的成分，往往是“類似物”。幸運(yùn)的是如果已知某一種元素的H，其它所有元素的H／‘均能間接求出。因?yàn)橐磺猩锊牧系脑氐倪B續(xù)譜都在相同的能帶中，元素的u／x值有如此關(guān)。因此若徠卡生物顯微鏡測(cè)量出其它萊一元素的此g2了（Ej），其u7*很容易求出。當(dāng)持測(cè)元素約Iyf已知后，將x射線信號(hào)輸入檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后，便可直接給出元素的濃度（m01A8）。

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